将预冻好的角膜连同盛装它的称量瓶迅速放入温度预先降至-20℃的干燥室内，关好干燥室门，开启真空泵，进行真空干燥。目的是去除角膜细胞内的水分，使细胞新陈代谢停止，处于休眠状态。
干燥室内的真空度依变幅值、变周期的循环压力法进行调节，此方法是在Mellor基于高压强化传热、低压强化传质原理的循环压力法基础上发展而来的，具体操作如下：角膜的冻干分成五个循环周期，以干燥室内的温度为标准，当温度到-25℃，干燥室内的山东真空泵真空度为50Pa时，开始**个周期，温度每升高5℃循环一次，循环5个周期，到0℃循环停止。0℃后一直干燥下去，直到干燥完成。每个周期低压的确定是以本周期内*低温度所对应的冰的饱和蒸汽压为基准，根据角膜干燥的程度使干燥室内的压力低于30～70Pa；高压的确定则以本周期内的*高温度所对应的冰的饱和蒸汽压为基准，根据角膜的程度，使干燥室内的压力略高于30～70Pa。周期的高压时间依次为2、2.5、3、3.5、4min；该时间的确定应保证冷冻层不能熔化。
每个周期的循环时间在30min左右，时间不能太短，否则导致细胞破裂。在角膜干燥的过程中，光靠抽真空很难达到干燥目的，在低温下冰的饱和蒸汽压很低，靠压力差产生的蒸汽扩散很小，而且升华过程需要升华潜热，所以干燥过程中要加热。干燥室内采用环形电热器以辐射的方式对角膜进行加热。角膜中冰的升华与其温度直接相关，一定要严格控制加热速度。在干燥的初始阶段，温升加快，细胞内的蒸汽压大，低温度下干燥室内较低的真空度便可以保证升华的进行。
